PCR實驗室又被稱為遺傳基因擴增實驗室,特點是能把少量的DNA大幅上升,PCR是生物學(xué)研究與實驗的基本方式,廣泛用于分子生物學(xué)各行各業(yè)。比如:hlv、乙肝、禽病疫、癌基因的檢查和確診,DNA指紋、個體識別、dna鑒定及法醫(yī)物證、動植物檢疫,小動物以及衍生品檢驗,飼料原料、護膚品、食品類衛(wèi)生檢測,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因食品微生物檢驗等。
本文從PCR實驗室合理布局、工作中區(qū)域的重要功能和設(shè)備配置、實驗室的排風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制、裝飾裝修材料規(guī)定及其它常見問題來講解。
一、PCR實驗室合理布局
正常情況下分成四個區(qū)域:試劑提前準(zhǔn)備區(qū)、試品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增物質(zhì)分析區(qū)。
PCR實驗室正常情況下為試劑提前準(zhǔn)備區(qū)、試品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增物質(zhì)分析區(qū)四個獨立的工作中區(qū)域并配有專用型過道,各工作中區(qū)域需設(shè)緩沖間,工作區(qū)域與緩沖間宜組裝連鎖加盟設(shè)備。不一樣的功能工作區(qū)域應(yīng)該是隔開獨立,各工作區(qū)域有明顯標(biāo)示,不可以直達,假如緊密結(jié)合,需組裝物件傳遞窗。
PCR實驗室區(qū)域設(shè)置并不是一成不變的,以下這些狀況必須表明:
1.假如樣版在擴增前需要破碎解決,就需要增加一個區(qū)域用以樣品破碎。
2.如果使用實時熒光PCR法,則擴增區(qū)和分析區(qū)能夠合并為一個區(qū)。
3.如果使用全自動PCR檢測儀,則樣本制備區(qū)、擴增區(qū)和分析區(qū)能夠合并為一個區(qū)。
前兩區(qū)為擴增后區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),擴增后區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴苛分離。實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清理材料及,需要從擴增后區(qū)流入擴增后區(qū),也就是從試劑提前準(zhǔn)備區(qū)、試品制備區(qū)到擴增區(qū)和擴增物質(zhì)分析區(qū),不可反向流動性。實驗室的氣旋也應(yīng)從擴增后區(qū)流入擴增后區(qū),不可反向流動性。各工作區(qū)域頂端應(yīng)組裝紫外線燈,紫外線燈的光波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外線燈。
二、實驗室各個區(qū)作用及關(guān)鍵設(shè)備
正常情況下的四大區(qū)域留意正壓力負壓力的控制。
1.試劑提前準(zhǔn)備區(qū):
關(guān)鍵開展試劑的制備、分開包裝和主反應(yīng)混合物的制備。試劑和用以試品制作出來的原材料應(yīng)立即運輸至該區(qū)域,不可通過其他區(qū)域。試劑原料務(wù)必存儲在本區(qū)內(nèi),并且在本區(qū)內(nèi)制備成所需要的試劑。本區(qū)關(guān)鍵設(shè)備有天平秤、電冰箱、離心脫水機、加樣器、震蕩器等。
針對氣旋的壓力操縱,本區(qū)并沒高的要求。
2.試品制備區(qū):
關(guān)鍵開展樣品儲存、核苷酸(RNA、DNA)獲取、存儲以及添加至擴增反應(yīng)管和檢測DNA的生成。本區(qū)關(guān)鍵設(shè)備有電冰箱、超凈工作臺、離心脫水機、加樣器、震蕩器、恒溫水浴槽等。
本區(qū)的滲透壓力要求為:相較于相鄰區(qū)域為正壓力,以防止從相鄰區(qū)進到本區(qū)的大氣氣溶膠環(huán)境污染。
3.擴增區(qū):
該區(qū)域功能的是DNA擴增和擴增精彩片段的測量。除此之外,反映混合物(來源于試劑存儲和制備區(qū))制備成反映混合物和已制備的DNA模版(來源于樣本制備區(qū))的加持等還可在本區(qū)中進行。針對氣旋的壓力操縱,相較于相鄰區(qū)域為負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區(qū)漏出來。為防止大氣氣溶膠所引起的環(huán)境污染,應(yīng)盡量避免在本區(qū)內(nèi)不必要行走。某些實際操作亦或者樣等需在超凈工作臺中進行。
該區(qū)域的機器通常是核苷酸擴增熱力循環(huán)儀、加樣器、超凈工作臺等。在其中熱力循環(huán)儀的開關(guān)電源應(yīng)專用型,并配置一個可調(diào)穩(wěn)壓電源或UPS,以避免因為工作電壓的變化對擴增測量影響的關(guān)鍵開展DNA擴增。
本區(qū)的滲透壓力要求為:相較于相鄰區(qū)域為負壓力,以防止大氣氣溶膠從本區(qū)漏出來。
4.擴增物質(zhì)分析區(qū):
擴增產(chǎn)物的測量。本區(qū)關(guān)鍵設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機、加樣器和沙浴箱等。
本區(qū)的壓力差的要求為:相較于相鄰區(qū)域為負壓力,以防止擴增物質(zhì)從本區(qū)蔓延至其他區(qū)域。
三、PCR實驗室排風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制
四大區(qū)域應(yīng)產(chǎn)生單邊流線型、應(yīng)采用全送全排。
各區(qū)域中間需具備單邊的試驗加工工藝流、貨運物流、人流量與氣旋,產(chǎn)生單邊步驟保護的天然屏障,防止試驗間的互相影響,避免大氣氣溶膠蔓延對實驗步驟導(dǎo)致環(huán)境污染。
PCR實驗室并沒嚴格凈化處理規(guī)定,可是為防止每個試驗區(qū)域交叉污染的概率,應(yīng)采用全送全排的自然通風(fēng)方式,嚴格把控送、排風(fēng)系統(tǒng)比例以確保各試驗區(qū)工作壓力規(guī)定。
此外,PCR實驗室內(nèi)一般有超凈工作臺、通風(fēng)櫥等生產(chǎn)線設(shè)備,這種機器設(shè)備風(fēng)量大而使用時長有間隔性,并不和空調(diào)機組使用時間一致,這就使得有這些機器設(shè)備房間在設(shè)備起停的時候特別非常容易過壓,本來正常滲透壓力一下子就破壞。這便是PCR實驗室空調(diào)機組定制的難題所屬。
四、PCR實驗室裝修設(shè)計
原材料規(guī)定:實驗室排架結(jié)構(gòu)應(yīng)堅固、密封性好。全部陽角線應(yīng)采用弧形銜接,墻面內(nèi)腔光滑、不積灰、抗腐蝕、易清潔消毒。路面應(yīng)用PVC卷材或環(huán)氧樹脂膠自流坪,原材料應(yīng)達到無間隙、沒有滲漏、光滑、抗腐蝕的需求。
五、PCR實驗室常見問題
試品制備區(qū)室內(nèi)空間會大些:
1.好多個區(qū)域大小設(shè)定狀況,試劑提前準(zhǔn)備區(qū)、擴增區(qū)、擴增物質(zhì)分析區(qū),室內(nèi)空間能夠相對性小一些,試品制備區(qū)域置放超凈工作臺和低溫箱,室內(nèi)空間應(yīng)大一些。
2.試劑提前準(zhǔn)備區(qū)、試品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以確保作業(yè)人員的安全性。
3.PCR實驗室并沒有嚴格凈化處理規(guī)定,也可以根據(jù)應(yīng)用情況和資金投入挑選。